黑曲霉糖化酶基因克隆及在酿酒酵母中的表达

摘要：

为了以酿酒酵母S78为宿主菌异源高效表达糖化酶基因,进一步扩大糖化酶基因在工业生产上的应用.运用RT-PCR法从黑曲霉中克隆得到糖化酶基因(glaA)cDNA,去除其信号肽编码区后的序列重组到酵母表达载体pVT102U/αADH1强启动子下游,并与α因子分泌肽信号序列融合.用PEG/LiAc法将构建的重组表达载体转入酿酒酵母S78菌株,筛选出的转化菌点种到可溶性淀粉平板上培养,用碘染法鉴定重组基因的表达情况.鉴定出了典型水解圈的酵母转化子,转化子接种到YPD培养基中摇瓶培养后,取发酵上清液经SDS-PAGE检测到分子量大小约为80 kDa的目标蛋白带,上清液用DNS法检测其淀粉酶最高酶活为28.86 IU/mL.表明糖化酶基因已在酿酒酵母S78中成功表达并能有效分泌到细胞外.

关键词：黑曲霉、糖化酶、酿酒酵母、异源表达

所属期刊栏目：32

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖南农业大学生物科学技术学院大学生创新项目sky201503

在线出版日期：2018-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：121-125