鲤鱼2种脂酰辅酶A脱氢酶基因cDNA克隆、表达及活性研究
为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制,使用RT-PCR 在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长cDNA序列,阅读框分别为1 275,1 326 bp,编码424,441个氨基酸,分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列:FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等,与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%.实时定量RT-PCR结果表明,MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达;不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响,但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激作用.此外,构建了原核表达载体MCADs-pEASY(E2)和LCADs-pEASY(E2),经IPTG诱导获得了原核表达蛋白,分子量分别为43.0,43.6 kDa.经检测这2个蛋白在370,450 nm处有明显的吸收峰,表明他们能自然结合FAD辅基.吩嗪硫酸甲酯反应法结果表明:MCAD和LCAD酶活性最适温度均为28 ℃,酶活分别为9.12,10.29 U/g.结果表明,与哺乳动物类似,鲤鱼MCAD和LCAD在肝脏和心脏表达量高;高不饱和脂肪酸对LCAD的表达有促进作用.
鲤鱼、MCAD、LCAD、克隆、原核表达、酶活性
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Q78(基因工程（遗传工程）)
中国水产科学研究院基本科研业务费专项课题2016HY-ZD0303;江苏省水产三新工程项目Y2015-4;中央级基本科研业务费项目2015JBFM10
2017-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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