灰葡萄孢BcKMO基因的原核表达分析
为构建灰葡萄孢犬尿氨酸单加氧酶(BcKMO)基因的原核表达载体并进行高效表达,获得纯化的BcKMO蛋白.以灰葡萄孢野生型BC22为试材,通过反转录PCR扩增BcKMO基因,回收BcKMO基因片段克隆到pMD19-T载体中,测序正确后,酶切pMD19-T-BcKMO和带有GST标签蛋白的pGEX4T-1质粒,将目的片段进行连接,构建BcKMO基因的原核表达载体pGEX4T-1-BcKMO-GST.经酶切和测序鉴定正确后,将构建好的原核载体转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21菌株中成功表达了与GST标签蛋白融合的BcKMO蛋白,大小约71 kDa.SDS-PAGE分析表明,该蛋白在0.2 mmol/L IPTG诱导12h时高效表达;Western Blot结果发现目的蛋白能与GST特异性抗体起特异性反应,表明BcKMO基因的体外诱导表达成功.
灰葡萄孢、BcKMO、原核表达、纯化、PCR
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S431.03;Q78(病虫害及其防治)
河北省高等学校科学技术研究项目ZD2016001
2017-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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