玉米 Zmcen 基因的克隆、表达与生物信息学分析

摘要：

为研究玉米 Zmcen 基因的特征及生物学功能，并对其编码蛋白结构与功能进行分析。以玉米 cDNA 为模板，将其构建到带有 GST 表达标签的原核表达载体 pGEX-6p-1中，构建的重组载体 pGEX-6p-ZmCen 转化至大肠杆菌BL21（DE3），通过0．3 mmol ／L IPTG 在27℃下诱导表达20 h，获得了可溶性的 GST 融合蛋白。采用 GST 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，经12％ SDS-PAGE 电泳和 GST 标签抗体 Western Blotting 检测，鉴定为含有 GST-Tag 的融合蛋白，纯化的蛋白经 PreScission Protease（PPase）过夜酶切切除 GST 标签，得到较纯的 ZmCen 蛋白；同时利用生物信息学的方法，解析 ZmCen 蛋白质的结构特征。结果表明，该基因定位于玉米第7＃染色体上，全长基因含有6个外显子和7个内含子，519 bp 的开放阅读框，编码172个氨基酸，分子量约为19．78 kDa，等电点为4．78。采用maizeGDB 数据库对玉米整个生命周期的表达水平进行分析表明，细胞分裂旺盛的部位，Zmcen 基因的表达量较高。对16种植物进行系统发育树分析显示，Zmcen基因与水稻、小麦、拟南芥等的 centrin 基因同源性高达80．21％，该结果为探索 Zmcen 蛋白的未知生物学功能提供了线索。

关键词：Zmcen 基因克隆、表达、纯化、生物信息学

所属期刊栏目：31

分类号：S512;Q71;Q78(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金项目21201024；山西省自然科学基金项目2012021009-1；山西省科技攻关项目20140311005-3

在线出版日期：2016-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：18-24