小麦 Ta-SKP2A 克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建

摘要：

SKP2A 是调控细胞周期转录因子降解的 F-box 蛋白。为研究该蛋白在小麦-叶锈菌互作过程的作用，首先克隆获得中国春小麦 Ta-SKP2A 全长序列，然后将其与 pGBKT7载体连接，转入酵母 Y187感受态细胞中，构建酵母诱饵表达载体，并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活效应。结果表明，Ta-SKP2A 编码区序列长度为1146 bp，其 ORF 区编码一条由382个氨基酸组成的多肽。在 ORF 区两侧连接酶切位点（EcoR Ⅰ和 BamH Ⅰ），并将其与载体 pGBKT7连接，成功构建了包含目的基因的诱饵载体 pGBKT7-Ta-SKP2A，且含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD ／-Trp营养缺陷平板上生长良好，其过夜培养物 OD600＞0．8，表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性。含重组诱饵质粒的酵母菌株在二缺、三缺及四缺营养缺陷平板上不能生长，表明诱饵质粒的表达产物不能自激活报告基因。成功构建了一个包含 Ta-SKP2A 的重组诱饵质粒，为深入筛选与其互作的靶蛋白，研究其在小麦-叶锈菌互作体系中的作用机制奠定了基础。

关键词：小麦、F-box 基因 SKP2A、诱饵载体构建、毒性检测、自激活效应

所属期刊栏目：31

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目31301649；高等学校博士学科点专项科研基金项目20121302120010

在线出版日期：2016-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：17-22