玉米籽粒蛋白质双向电泳技术体系的优化

摘要：

为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法，建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系，对酚抽提法、三氯乙酸／丙酮沉淀法（ TCA／丙酮沉淀法）和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析，并在相同条件下进行双向电泳比对分析，结果表明：可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富，最适合双向电泳研究；利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白，对第一向等电聚焦参数等条件，以及不同pH值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析，结果表明：采用pH值3～10的IPG预制凝胶条时，采取电压梯度上升的方式，总聚焦70000 Vhs、上样量800μg效果最佳，采用pH值4～7的IPG预制凝胶条时，总聚焦80000 Vhs、上样量900μg效果最佳，并且采用pH值4～7的IPG预制凝胶条相比pH值3～10的凝胶条能分离到更多的点，最后结合蛋白质点MALDI-TOF-TOF质谱鉴定分析，建立了一套适用于玉米籽粒的蛋白质双向电泳技术方法，即采用可溶性蛋白提取法提取蛋白，采用24 cm、pH值4～7的IPG干胶条，上样900μg电泳效果最佳，等点聚焦程序：500 V、1 h，1000V、1 h，2000 V、1 h，4000 V、2 h，8000 V、4 h，8000 V、80000 Vhs，500 V保持。试验研究为后续玉米籽粒发育差异蛋白研究奠定了技术基础。

关键词：玉米、籽粒、蛋白组学、双向电泳

分类号：S513.03(禾谷类作物)

资助基金：内蒙古农牧业科学院青年创新基金项目2011QNJJN09；国家粮食丰产科技工程项目2011BAD16B13；2012BAD04B04；2013BAD07B04

在线出版日期：2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：171-176