猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立

摘要：

为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平，用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原，建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA 方法。 ELISA 的最佳工作条件是：抗原包被浓度为0．5μg／mL，包被时间4℃过夜，5％脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100；37℃作用45 min，辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG稀释度为1∶10000，37℃温育60 min，底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0．30判为阳性，OD450nm≤0．27判为阴性，介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验，结果表明，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份，总阳性率为68．5％。

关键词：猪流行性腹泻病毒、重组N蛋白、ELISA

分类号：S828(家畜)

资助基金：浙江省三农六方项目2012R22A60C01；浙江省重大科技专项重点农业项目2012C12009-1

在线出版日期：2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：123-129