绿脓杆菌SYBR Green I实时定量PCR 检测方法的建立及初步应用

摘要：

为了建立绿脓杆菌的SYBR Green I实时定量PCR检测方法，以便更加快捷、方便的检测绿脓杆菌，根据16S rDNA高度保守的特性，在绿脓杆菌16S rDNA保守区设计1对引物，利用普通PCR技术扩增出绿脓杆菌16S rD-NA保守区277 bp的片段，并克隆到pMD-18 T载体上，纯化的质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了绿脓杆菌的荧光定量PCR检测方法。并对方法的灵敏性、特异性、重复性进行评价，又进一步在临床实践中进行检验。结果显示，所建立的方法对标准样品的最小检出浓度为28拷贝/μL。并且特异性检验结果显示与常见的菌群没有交叉反应，重复性良好。在临床中检测疑似绿脓杆菌感染病料55份，用所建立的荧光定量方法检测出阳性病料40份，而普通的PCR方法检测出阳性病料32份。表明建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可以在临床中用于绿脓杆菌的检测。

关键词：绿脓杆菌、16S rDNA、荧光定量PCR

分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省重大科技专项111100110300;国家质检总局科技计划项目2013QK233

在线出版日期：2014-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：59-63