甘薯近5种Ipomoea trifida（Kunth）G. Don基因组Fosmid文库构建及PCR筛选体系建立
为挖掘有价值的基因资源,对甘薯近缘种I. trifida的基因组文库进行了研究。通过流式细胞法测定I. trifi-da(2x,编号DLP4597)基因组大小为531.699 Mb。以叶片为材料采用包埋法提取基因组DNA,通过物理剪切进行基因组DNA片段化并进行末端平滑化和磷酸化处理,脉冲场电泳回收33~48 kb的DNA片段,然后连接到Fosmid载体pCC1FOS(Epicentre)上,包装转化大肠杆菌EPI300,构建了I. trifida的基因组Fosmid文库,该文库包含101952个单克隆,保存于1062个96孔培养板中,平均插入片段35 kb,覆盖基因组约6.7倍,理论上任意片段筛出率达到99.88%。以20个96孔板为一组构建三维PCR筛选体系,共分为53个组(第53组包含22个96孔板),每组包含1个超级池,20个板池,12个列池,8个行池,理论上最多通过93个PCR反应即可筛选到1个阳性单克隆。随机选择来自I. trifida的10个基因进行文库克隆筛选,平均阳性克隆数为8.2个,最少阳性克隆数为3个,最多为16个。
甘薯近缘野生种、基因组、Fosmid文库、文库筛选体系
Q78(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金项目31371681,30800698;国家甘薯产业技术体系CARS 11-B-02;农业部948项目2011-G1-20;国家“863”项目2012AA101204-1-8
2014-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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