禽呼肠孤病毒σ3蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

摘要：

用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定.将ARV σ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包被抗原,测定纯化后蛋白的浓度,按每鼠100 μg的蛋白用量免疫BALB/c小鼠,免疫4次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合.对融合后的杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,通过间接E-LISA方法测定其抗体效价,并通过Western Blot、Dot-ELISA、直接免疫荧光、病毒中和等方法对获得的单抗特性进行检测.结果通过纯化的病毒含量为41.5 mg/mL,应用纯化的病毒免疫BALB /c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得1株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株σ3 B6-3 K3,用其制备的腹水经间接E-LISA测定效价达105以上,并且与其他参试病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性；病毒中和试验证明其中和能力低.应用ARVσ3蛋白制备并获得的杂交瘤细胞株σ3 B6-3 K3具有很好的特异性,不具有中和ARV的关键表位,可以用于ARV的特异性检测.

关键词：禽呼肠孤病毒、σ3蛋白、单克隆抗体、制备、鉴定

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分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学资金31160512;广西科技重大专项桂科重 1222003-2-4;广西特聘专家专项2011B020;广西回国基金项目桂科回 0639016

在线出版日期：2013-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：135-139