猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

摘要：

采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列.将BamH Ⅰ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2.NotⅠ酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2.测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因长482 bp,包含1个完整读码框(465 bp),与GenBank 中其他5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9％.重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础.

关键词：猪白细胞介素-2、克隆、重组禽痘病毒、载体、构建

所属期刊栏目：26

分类号：S828.2;Q782(家畜)

资助基金：国家"十一五"科技支撑计划专项2006BAD06A08

在线出版日期：2012-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：71-75