HRP标记的二抗检测heme结合蛋白造成假阳性问题的探讨

摘要：

为了验证对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)作为二抗标记物在检测 heme结合蛋白时产生假阳性问题的推测,以菠菜细胞色素b6 f 复合体(Cyt b6f)和铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶(FNR)为检测对象(前者含有 heme 结合蛋白 Cyt f,后者不含 heme 基团),采用菠菜FNR一抗、HRP和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记的二抗,设计对比实验.结果表明,在使用 HRP标记的二抗体系中,Cyt f 不经一抗和二抗孵育即可显色,这是明显的假阳性;而在ALP标记的二抗体系中,Cyt f 条带不显色,只有 FNR 条带显色.在 western blot 实验中,如果被检测蛋白为heme结合蛋白或者混有少量 heme 结合蛋白,应避免采用 HRP 标记的二抗,建议使用ALP标记的二抗或者其他二抗产品;heme结合蛋白具有类似 HRP 的氧化还原酶活性,其本身可以和显色液反应,从而产生假阳性,干扰对实验结果的判断.

关键词：植物生物化学、蛋白免疫印迹杂交、辣根过氧化物酶、heme结合蛋白、假阳性

所属期刊栏目：40

分类号：Q503;Q554+.6(一般性问题)

资助基金：河北省自然科学基金C2008000684

在线出版日期：2019-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：273-278