HPLC 法测定 Mucor sp．产肉桂酸降解酶的活性和动力学分析

摘要：

建立了高效液相色谱法测定肉桂酸降解酶活性的方法。以肉桂酸为底物、苯乙酮为探针，通过测定苯乙酮的生成速率来计算酶活并进行酶催化动力学分析。色谱柱为 Hypersil ODS2柱（250 mm×4.6 mm，5μm），柱温为30℃，流动相为乙腈∶水∶冰乙酸＝50∶50∶0.5（体积比），流速为1.0 mL·min－1，检测波长为247 nm。苯乙酮的线性范围为1.952～156.2μg·mL－1，回收率为99.46％～101.2％，RSD≤1％，检出限为0.45μg·mL－1（S／N ＝3）。结果表明，该方法稳定可靠，简便，重复性好，不受杂质干扰，可用于肉桂酸降解酶的活性测定和动力学分析。粗酶液和不同浓度的肉桂酸在30℃下反应2 h 后，HPLC 法测定初反应速率，以双倒数作图法计算酶动力学参数，双倒数图呈直线，符合米氏方程规律，米氏常数 K m ＝0.07 g·L－1，即0.473μmol·L－1，V max＝0.058μmol·min－1·mg－1。

关键词：HPLC、酶活、肉桂酸、苯乙酮、动力学分析

分类号：O657.72(分析化学)

资助基金：广西教育厅资助项目2013ZL006

在线出版日期：2015-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：62-65