基于脯氨酸理论提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A 的热稳定性

摘要：

以枯草芽孢杆菌脂肪酶 A（LipA）为研究对象，根据从 RCSB 数据库中获取的晶体结构，采用分子动力学模拟和分子生物学实验相结合的方法进行脂肪酶热稳定性位点突变的理性设计。首先，利用分子动力学模拟获得晶体结构中柔性较高的 Loop 区域；进而，结合“脯氨酸理论”，将位于该区域附近的 Gly 残基突变为 Pro，分析引入 Pro 突变对LipA 热稳定性的影响，筛选得到 Gly52和 Gly158两个突变位点；最后，通过定点突变操作对突变株 LipAG52P和 LipAG158P进行热稳定性实验验证。结果显示，突变株 LipAG52P 、LipAG158P 的比活力分别是野生型 LipA 的5.6倍和2.7倍，T m 值分别提高了15℃和7℃，催化效率分别提高了85％和22％。

关键词：枯草芽孢杆菌脂肪酶 A、分子动力学模拟、脯氨酸理论、定点突变、热稳定性

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金资助项目21106064;江苏省自然科学基金资助项目BK20131046，BK20130917

在线出版日期：2014-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：25-30