烟曲霉Aspergillus Fumigatus3-甾酮-Δ1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

摘要：

微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型.以烟曲霉(A.fumigatus)为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列.该基因与玫瑰色热微菌(Thermomicrobium roseum)DSM5159的kstD一致性为51%.构建pET28a(+)-kstDF表达载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (λDE3),获得高表达重组子菌株.经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温(37℃)有利于KstDF蛋白表达,低温(20℃)有利于酶活的保持.该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础.

关键词：烟曲霉、烟曲霉酸、3-甾酮-1-脱氢酶、雄甾-4-烯-3、17-二酮、雄甾-1、4-二烯-3

所属期刊栏目：28

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划资助项目2008AA02Z209

在线出版日期：2011-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：29-34