10.3969/j.issn.2095-140X.2014.07.013
人 GADD45α荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定
目的:为检测环境中可能存在的致癌物,建立生长阻滞和 DNA 损伤诱生蛋白45(GADD45α)双荧光素报告基因系统,构建新型人 GADD45α荧光素酶报告基因质粒。方法在 GADD45α基因启动子序列2.2 kb 及其后基因组 DNA 序列2.6 kb 范围内,设计3对引物进行搭桥 PCR,获得全长为4924 bp 的目的序列,插入 pGL4.10[luc2]质粒相应位点内。质粒构建成功后测定全长并进行酶切鉴定。结果正确扩增了全长为4.9 kb 的人 GADD45α基因片段,成功构建了人 GADD45α报告基因质粒(pGD2.2K-luc2)。结论在质粒设计中加入了存在 p53非依赖性 BRCA1结合位点的 GADD45α基因第1个内含子,构建成功的 pGD2.2K-luc2,为转染人源性细胞建立 GADD45α双荧光素报告基因系统打下了基础。
生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45、乳腺癌易感基因、聚合酶链反应
R114(卫生基础科学)
中国检验检疫科学研究院专项资金资助项目2012JK043
2014-08-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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