含 pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究

摘要：

目的：制备含 pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌 TPIN 并检测其稳定性。方法将 pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌 Ty21a 感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株 TPIN；将 TPIN 在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的 LB 培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB 培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR 扩增酶切鉴定；TPIN 转染 HepG2细胞后采用 RT-PCR 检测IL-2和 NK4基因表达,ELISA 法检测细胞培养上清 IL-2和 NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR 扩增获得目的基因 IL-2、NK4特异条带；在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB 培养板传代培养40代的 TPIN 菌株均可扩增并双酶切出目的基因 IL-2及 NK4；TPIN 体外转染 HepG2细胞后,IL-2及 NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/ NK4双基因的减毒沙门菌菌株 TPIN 可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外 IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。

关键词：白细胞介素 2、NK4、沙门菌菌苗、疫苗、减毒、基因

分类号：R186.9(流行病学与防疫)

资助基金：甘肃省科技重大专项1302FKDA039;兰州市科技项目2011-2-60;全国博士后基金20060390192

在线出版日期：2014-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：33-38