AEP环化酶的高效原核诱导表达与活性检测体系的建立

摘要：

天冬酰胺内切酶(AEPs)可催化短肽形成结构异常稳定的环肽,其具有药物设计框架的应用前景.将来源于白花蛇舌草(Oldenlandia affinis)中AEP(OaAEP1b)环化酶(cyclase)基因采用融合标签表达的策略在大肠杆菌菌株BL21中进行诱导表达,并比较了不同的融合标签麦芽糖结合蛋白( MBP),N-utilization substance A( NusA),小泛素修饰蛋白(SUMO),绿色荧光蛋白(GFP)以及泛素(ubiquitin)对AEP环化酶表达量的影响.结果表明,MBP标签对AEP的表达促进作用最强,达到(3. 6 ± 0. 05) mg/L,是目前文献报道的2倍.体外酶切实验证实该环化酶可对融合表达的底物蛋白MBP-Kalata B1-6?His-GST进行有效切割,但连接反应过程有待验证.本研究对AEP环化酶进行肽工程研究与应用奠定了较好的基础,并提供了一套高效的研究工具.

关键词：AEP环化酶、环化肽、大肠杆菌、融合表达

所属期刊栏目：42

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖北省自然科学基金2017CFB538

在线出版日期：2020-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：20-26