Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化

摘要：

来源于Pyrococcus furiosus COM1菌的Pfu DNA聚合酶具有保真性高、延伸速度快、热稳定性强等特点,能够提高PCR反应过程中的扩增效率,减少错误碱基掺入率.以大肠杆菌Rosetta(DE3)为重组细胞,利用一种快速表达纯化方法,让Pfu DNA聚合酶的表达纯化过程变得更加简便,并维持其高活性.结果表明,Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中能够进行大量表达,同时60℃高温水浴能有效去除杂蛋白,简化纯化步骤及提高Pfu DNA聚合酶纯度.经过一系列纯化步骤处理后.Pfu DNA聚合酶仍然能够保持较好的酶活,且在100 μL PCR反应体系中,加入4μL的1 mg/mLPfu DNA聚合酶液效果最佳.

关键词：Pfu DNA聚合酶、Rosetta(DE3)、亲和层析、PCR检测

所属期刊栏目：41

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：油料脂质化学与营养湖北省重点实验室开放基金

在线出版日期：2019-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：223-227