优化合成有机磷水解酶opd p基因 在毕赤酵母中的表达

摘要：

拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1149 bp(base pair).基因克隆入pHBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒pHBM905BDM-opd p,以及多拷贝表达质粒pHBM905BDM-opd p-2C,pHBM905BDM-opd p-3C,pHBM905BDM-opd p-4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2 U/mL.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.

关键词：毕赤酵母、有机磷水解酶、opd基因、分泌表达

所属期刊栏目：40

分类号：Q78;Q933(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31300074

在线出版日期：2018-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：7-11,23