变形杆菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的 展示表达及重组酶的特性

摘要：

在生物转化处理工业中利用细胞表面展示技术表达脂肪酶作为一种全细胞催化形式具有很大优势,因为脂肪酶展示在细胞表面作为一种固定化酶.以超折叠绿色荧光蛋白的羧基端结构域作为锚定区,构建变形杆菌来源的脂肪酶与羧基端结构域的融合基因.将融合基因插入到pETsfGFP表达载体中,得到表面展示载体pETsfGFP-LipA.将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-Blue宿主菌中经自诱导后,利用免疫荧光显微技术和流式细胞仪分析确定脂肪酶成功展示于大肠杆菌细胞表面.重组酶的最高酶活达到7009 U/g干细胞,最适反应温度和pH分别为为37℃和8.0,表面活性剂TirtonX-100、Co2+和Ni2+能显著提高脂肪酶的酶活,60％丙酮处理该酶18 h后脂肪酶残余酶活性为104％,60％乙醇处理该酶18 h后脂肪酶残余酶活性为117％,表明脂肪酶对有机试剂具有很好的耐受性.以上实验结果表明:细胞表面展示技术表达脂肪酶的最大优点为工业化应用提供了坚实的基础.

关键词：表面展示、融合表达、脂肪酶、全细胞催化剂

所属期刊栏目：40

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：基金资助:国家自然科学基金31100124;湖北省教育厅重点项目D20131004

在线出版日期：2018-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

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