β-1,4-内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

运用选择性培养基LBCMC从环境土样中分离得到一株能利用羧甲基纤维素的芽孢杆菌Bacillus sp.NW-2004a,并运用"鸟枪"克隆法构建了其基因组文库,且从此基因组文库中筛选得到两个阳性克隆.对其中一阳性克隆中插入的DNA片段(命名为GLUD)进行序列测定,发现了一长度为2 502 bp的开放阅读框(ORF),可编码834个氨基酸.BLAST分析结果表明,该基因与Bacillus sp.KSM-S237来源的纤维素酶基因AB018420具86 %相似性,所编码的多肽与Bacillus sp.KSM-64来源的β-1,4-内切葡聚糖酶具89 %的相似性,故该基因是一新发现的β-1,4-内切葡聚糖酶基因.该序列已收录于Genebank,登录号AY663839 .另外,以CpoI and NotI限制性内切酶双酶切衍生于质粒pGEX的大肠杆菌表达载体pHBM625,然后将经T4 DNA polymerase处理后的β-1,4-内切葡聚糖酶基因克隆至载体pHBM625中得到重组质粒pHBM625Glu,最后通过平板检测及SDS-PAGE凝胶电泳,均检测到该基因在大肠杆菌XL10-Glod中的表达.

关键词：基因组文库、β-1、4-内切葡聚糖酶基因、大肠杆菌表达

所属期刊栏目：27

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点实验室基金AML-0303;湖北省武汉市科技攻关项目20026002087

在线出版日期：2005-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：275-279