miR-483-5p靶向Timp2调控破骨细胞的生成

摘要：

目的:miR-483-5p可促进破骨细胞分化和骨破坏,本研究探讨miR-483-5p是否通过靶向作用于Timp2调控破骨细胞的生成.方法:采用miRNAs靶基因预测软件TargetScan8.0对miR-483-5p的靶基因进行预测,并构建野生型和突变型3'UTR质粒,通过双荧光素酶报告基因验证靶基因是否与miR-483-5p存在靶向调控关系.用免疫印迹方法检测miR-483-5p的mimics或inhibitor转染细胞后靶蛋白表达水平的相应变化.用靶基因siRNA或靶蛋白慢病毒转染或感染细胞,RANKL诱导后分别进行TRAP染色和q-PCR检测.结果:运用生物信息学软件预测miR-483-5p的靶基因,发现具有调控破骨细胞作用的Timp2基因,且双荧光素酶报告基因检测系统发现miR-483-5p可以与预测的靶基因Timp2基因的3′-UTR位点互补,两者之间存在靶向调控关系.在RAW264.7细胞中上调miR-483-5p水平可减少Timp2的表达;敲低细胞中的Timp2,诱导后较正常组破骨细胞数量显著增多,且破骨细胞特异性基因表达升高.将靶基因和miR-483-5p共转染入细胞后,与正常组相比,破骨细胞数显著减少,特异性基因表达降低.结论:Timp2作为miR-483-5p的下游靶点,参与并抑制了破骨细胞的生成.

关键词：miRNA、破骨细胞、骨破坏、Timp2

所属期刊栏目：29

分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金;海南医学院引进人才科研启动经费

在线出版日期：2023-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1041-1046,1055