10.13210/j.cnki.jhmu.20200731.002
哮喘中miR-29b、B7-H3调控巨噬细胞极化影响CD4+T细胞分化的作用及机制研究
目的:探讨miR-29b、B7-H3调控巨噬细胞极化从而对CD4+T分化产生影响的机制.方法:(1)收集在苏州大学附属儿童医院就诊的哮喘患儿及正常儿童外周血分离外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA并进行逆转录,采用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)技术测定miR-29b、B7-H3mRNA的表达,并收集患儿的哮喘家族史、变应性疾病史等.(2)THP-1细胞诱导为巨噬细胞后,用LV526、LV527和NC病毒侵染诱导成功的巨噬细胞形成miR-29b干扰、miR-29b过表达以及正常对照组,培养24 h后收集细胞检测STAT3和B7-H3基因及蛋白水平的表达.(3)验证STAT3为miR-29b的靶基因:接种THP-1细胞,加终浓度为50 ng/mL的PMA培养6 h后,换无PMA完全培养基继续培养24 h,然后用LV526、LV527和NC病毒侵染诱导成功的巨噬细胞形成miR-29b干扰、miR-29b过表达以及正常对照组,48 h进行荧光素酶分析来验证STAT3为miR-29b的靶基因.构建STAT3-3′-UTR荧光素酶报告基因质粒,并分为3组"miR-29b+STAT3-3′-UTR"、"miR-29b+STAT3-mut-3′-UTR"、"miR-29b+荧光素酶空载".(4)不同处理方式的巨噬细胞与初始T细胞共培养3 d,Q-PCR检测T-bet、GATA3、ROR-γt的相对表达量.结果:(1)哮喘急性发作期组患儿的变应性疾病发生率高于其他两组(P=0.032),对照组的哮喘家族史远低于其他两组,差别具有统计学意义(P=0.001).(2)哮喘急性发作期组PBMC中B7-H3表达量高于哮喘非急性发作期组与对照组,对照组PBMC中miR-29b表达量明显高于哮喘患儿非急性发作期组与急性发作期组(P<0.0001),哮喘非急性发作期组miR-29b表达量高于哮喘急性发作期组,差异有统计学意义(P=0.007).(3)沉默表达miR-29b后巨噬细胞IL-4Rα、IL-4、IL-5、IL-13、CD206明显升高,而IFN-γ下降,提示miR-29b可以促进巨噬细胞向M2极化.(4)巨噬细胞过表达miR-29b,STAT3、B7-H3基因水平及蛋白水平表达下降;抑制miR-29b,STAT3、B7-H3基因水平及蛋白水平表达上升.(5)巨噬细胞STAT3与B7-H3mRNA的表达成显著正相关(r=0.9737,P<0.0001).(6)STAT3是miR-29b的靶基因.(7)巨噬细胞与CD4+T细胞共培养,可促进初始T细胞即Th0细胞向Th2方向分化,其中下调miR-29b的巨噬细胞促进作用更明显.结论:哮喘患儿PBMC中miR-29b表达量低于对照组儿童,而B7-H3高于对照组儿童,初步猜想miR-29b对于哮喘儿童具有保护作用,而B7-H3加重炎症反应.在巨噬细胞中下调miR-29b,可促进巨噬细胞向M2极化,巨噬细胞B7-H3及STAT3表达增加,使Th0细胞向Th2细胞分化,加重哮喘患者炎症反应.
miR-29b、B7H3、哮喘、CD4+T细胞、PBMC
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R725.6(儿科学)
国家自然科学基金项目81570016,81771676,81970027
2021-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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