高通量基因芯片检测阻断Cyclin B1后基因的差异表达

摘要：

目的:研究Cyclin B1敲低后差异表达的基因,并筛选出与自噬相关的基因.方法:利用胸腺核苷(TdR)双阻断法使鼻咽癌细胞CNE-2周期同步化至S期,siRNA干扰Cyclin B1的表达,流式细胞术验证转染效率,q-PCR和western blot验证siRNA沉默效率,高通量基因芯片筛选对照组和实验组差异表达的基因.结果:经25.mmol/L的TdR同步化后,流式细胞仪检测细胞周期,获得S期细胞.用脂质体转染法将FAM-siRNA导入CNE-2细胞后,流式细胞术检测转染效率为85.6％,将Cyclin B1-siRNA导入CNE-2细胞后,Cyclin B1的mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降85％(P<00.1).基因芯片结果显示与对照组相比,转染Cyclin B1-siRNA后一共有2408个差异表达的基因,其中1245个基因显著上调,1163个基因显著下调,初步筛选出上调的自噬相关基因PTEN.结论:Cyclin B1-siRNA可以有效地沉默Cyclin B1蛋白的表达,并可以使2408个基因差异表达,初步筛选出上调的自噬相关基因PTEN.

关键词：Cyclin B1、细胞周期同步化、高通量基因芯片、自噬相关基因

所属期刊栏目：24

分类号：R730;R34(肿瘤学)

资助基金：This study was funded by the Natural Science Foundation of Fujian Province 2015J01457.福建省自然科学基金2015J01457

在线出版日期：2018-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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