利用RNA干扰技术下调Lon基因表达的生物学效应研究

摘要：

目的:通过构建Lon基因下调的哺乳动物细胞模型表达,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响,以探讨Lon蛋白的功能.方法:设计针对Lon蛋白酶的小干扰RNA(siRNA),构建pSilencer U6 2.1-Lon真核表达载体,用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR检测Lon基因下调的水平,通过采用高温、紫外线照射、顺铂处理,观察Lon基因下调后细胞敏感性的变化(MTT法).结果:RT-PCR显示重组质粒pSilencer U6 2.1-Lon转染MCF7细胞,Lon基因明显下调,RT-PCR未见扩增目的带,细胞培养结果显示,细胞增殖能力明显减弱.紫外线照射和顺铂处理后的MTT结果显示,pSilencer U6 2.1-Lon转染的MCF7细胞,增殖能力明显下降,与空载体转染组(pSilencer U6 2.1)和未转染组相比有显著性差异(P＜0.05).加热应激试验显示,37,41,43℃处理后,RNA干扰转染组(pSilencer U6 2.1-Lon)与空载体转染组、未转染组相比有显著性差异(P＜0.05).而在45℃时,RNA干扰转染组、空载体转染组与未转染组之间均无显著性差异(P＞0.05).结论:RNAi能有效下调Lon蛋白的表达.Lon基因的下调可抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖能力,诱导细胞凋亡,以及可增加MCF7对紫外线和顺铂处理的敏感性.

关键词：RNA干扰、Lon基因、细胞凋亡

所属期刊栏目：12

分类号：R737.9;Q556+.9(肿瘤学)

在线出版日期：2007-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：502-506,509