miRNA-149改善坐骨神经慢性压迫损伤大鼠神经病理性疼痛的机制研究

摘要：

目的 探究miR-149对大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性疼痛(NP)的影响及分子机制.方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、CCI组、CCI+miR-149 agomir阴性对照(CCI+agomir-NC)组、CCI+miR-149 agomir组、CCI+miR-149 agomir+pc-NC组、CCI+miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组,每组12只.采用CCI诱导建立NP大鼠模型,于建模前及建模后的第3天、第7天、第11天、第14天利用Von Frey检测大鼠的机械痛敏,热辐射法检测大鼠的热痛敏;建模后第14天用RT-qPCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-149和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测DRG中CaMKⅡγ蛋白水平;尼氏(Nissl)染色观察DRG神经元尼氏小体变化;免疫荧光法检测脊髓神经元中CaMKⅡγ表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测DRG中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和干扰素-γ(IFN-γ)含量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与CaMKⅡγ的靶向关系.结果 与sham组比较,CCI组大鼠机械痛阈值和热痛阈、DRG中miR-149表达下降,DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量、TNF-α、IL-1β和IFN-γ水平升高,且DRG中尼氏小体减少,差异均有统计学意义(P<0.05).过表达miR-149可改善CCI大鼠机械痛阈和热痛阈,降低DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量以及TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平,尼氏小体明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05).与CCI+miR-149 agomir+pc-NC组比较,CCI+ miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组机械痛阈值和热痛阈下降,DRG中CaMKⅡγ的mRNA和蛋白水平、CaMKⅡγ阳性表达神经元数量、TNF-α、IL-1β和IFN-γ水平升高,尼氏小体减少,差异均有统计学意义(P<0.05).双荧光素酶结果显示,过表达miR-149可降低CaMKⅡγ-WT的荧光素酶活性.结论 过表达miR-149可能通过靶向抑制CaMKⅡγ表达,缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛.

关键词：SD大鼠、神经病理性疼痛、miR-149、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ、神经炎症、病理性疼痛、作用机制

所属期刊栏目：34

分类号：R-332(医学研究方法)

在线出版日期：2023-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2898-2905