石骨症特异诱导多能干细胞的建立及其功能研究

摘要：

目的 探讨氯离子第7通道蛋白(CLCN7)突变所致常染色体显性遗传骨硬化症2型(ADO2)患者破骨细胞发育相关的调控因子及其功能.方法 选择2017年10月至2019年10月在中信惠州医院确诊为ADO2且CLCN7基因突变的患者10例作为实验组,同时将正常健康受检者10例作为对照组.将诱导多能干细胞(iPSCs)培养为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、苏木精(Hatmatoxylin)-伊红(Eosin)HE染色、荧光染色等并利用实时荧光PCR(qPCR)技术检测各种来源的破骨细胞CLCN7调控因子(ITGB5、CES1、PERF1、SERPINE2、WARS、GBP4、UCHL1)mRNA表达情况,采用Western blot法检测蛋白表达.采用基因表达谱芯片技术分析ADO2特异破骨细胞的基因表达谱,验证CLCN7突变对破骨细胞发育成熟相关通路的影响.结果 通过qPCR技术检测mRNA可知,与对照组比较,实验组患者ITGB5的比例高46％,CES1的比例高143％,PERF1的比例低48％,SERPINE2的比例低53％,WARS的比例低39％,GBP4比例低28％和UCHL1的比例高58％,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组的供体破骨细胞比较,实验组患者细胞中ITGB5的表达增加278％,SERPINE2表达下降51％,WARS表达下降68％和PERF1表达下降49％,差异均有统计学意义(P<0.05);分析基因转染模型发现,实验组的ITGB5表达水平为(1.25±0.31)EU/μg,明显高于对照组的(0.93±0.23)EU/μg,PERF1表达为(1.07±0.26)EU/μg,明显低于对照组的(1.51±0.39)EU/μg,差异均有统计学意义(P<0.05);两组WARS和SERPINE2表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CLCN7突变所致的ADO2患者基因转染模型中ITGB5表达上调和PERF1表达下降,可能与破骨细胞功能障碍有关.

关键词：常染色体显性遗传骨硬化症2型、氯离子第7通道蛋白、破骨细胞、多能干细胞、调控因子

所属期刊栏目：31

分类号：R681(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：广东省惠州市科技计划项目编号:170511141740464

在线出版日期：2020-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2177-2180