siRNA干扰Nrf2基因对铅染毒TK6细胞凋亡和氧化应激的影响

摘要：

目的 研究应用siRNA抑制Nrf2基因表达后对乙酸铅染毒所致TK6细胞凋亡和氧化应激的影响.方法 体外培养TK6细胞,设正常组、阴性对照组及Nrf2-siRNA1、Nrf2-siRNA2、Nrf2-siRNA3转染组.Western blot验证转染效果,筛选出干扰效果最佳序列.采用480 μmol/L的乙酸铅染毒TK6细胞,运用流式细胞技术、2',7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析、高度水溶性四唑盐(WST-1)法技术检测TK6细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 正常组、阴性对照组、Nrf2-siRNA1转染组、Nrf2-siRNA2转染组、Nrf2-siRNA3转染组细胞Nrf2蛋白表达水平分别为1.00±0.08、0.96±0.07、0.71±0.05、0.58±0.07、0.20±0.07,差异有显著统计学意义(F=29.361,P＜0.01),其中Nrf2-siRNA3转染组的Nrf2蛋白表达水平低于其他四组细胞,故选用Nrf2-siRNA3转染组进行后续实验;经乙酸铅染毒TK6细胞24 h后,Nrf2-siRNA3转染组细胞凋亡率为(26.8±2.13)％,与正常组的(8.5±1.79)％及阴性对照组的(9.0±2.02)％比较,差异均有显著统计学意义(P＜0.01);Nrf2-siRNA3转染组细胞内ROS探针荧光强度为21 621±345,与正常组的14 141±289及阴性对照组的14 694±301比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01);Nrf2-siRNA3转染组细胞SOD含量为(13.3±2.8) U/mg· prot,与正常组的(34.6±3.3) U/mg· prot及阴性对照组的(31.9±3.2) U/mg· prot比较差异均具有显著统计学意义(P＜0.01).结论 Nrf2基因表达受抑制后,TK6细胞对铅毒性的敏感性增强,TK6细胞凋亡率增加和抗氧化损伤能力下降.

关键词：TK6细胞、Nrf2基因、siRNA、细胞凋亡、氧化应激

所属期刊栏目：30

分类号：R394

资助基金：福建省福州市卫生计生科研创新团队培育项目编号:2016-S-wt12

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2725-2728