靶向S1PR3基因shRNA慢病毒表达载体构建及功能鉴定

摘要：

目的：构建靶向小鼠S1PR3基因的shRNA慢病毒表达载体，并验证其对内皮祖细胞迁移能力的影响。方法依照shRNA设计原则，合成对应的shRNA序列，将其克隆到PHBLV载体中，使用三载体系统进行病毒包装，收集制备成功的病毒，并用荧光显微镜法测定病毒滴度，使用病毒感染EPC后，测定各组细胞中S1PR3蛋白表达情况，选择合适的病毒感染EPC后，测定其对EPC迁移能力的影响。结果成功将shRNA序列克隆到慢病毒表达载体PHBLV-U6-RFP，表达质粒与辅助质粒共转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达红色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠EPC，可以不同程度干扰细胞中S1PR3蛋白表达，S1PR3蛋白表达受到抑制后，EPC的迁移能力明显减弱。结论我们成功构建了可以有效干扰S1PR3表达的慢病毒载体，并初步观察了其对EPC细胞的迁移能力的影响，为后续进一步调控S1PR3相关的细胞功能的研究奠定了基础。

关键词：慢病毒、1-磷酸鞘氨醇受体3、内皮祖细胞、细胞迁移

所属期刊栏目：27

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金编号81300153

在线出版日期：2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1721-1726