小鼠S1PR3慢病毒表达载体的构建及表达

摘要：

目的：构建小鼠1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)慢病毒表达载体，并检测其表达情况。方法小鼠心肌组织mRNA并逆转录得到cDNA，设计并合成引物，采用亚克隆方式将目的基因克隆至慢病毒表达载体pLent-IRES-EGFP中，将表达载体与包装质粒共转293T细胞，进行目的基因的过表达慢病毒包装，随后收集培养成功病毒，使用病毒感染小鼠L929细胞，检测感染后L929细胞表达S1PR3情况。结果从小鼠心机组织cDNA中扩增出大小约1100 bp的目的片段；双酶切后成功将S1PR3克隆到慢病毒表达载体pLent-IRES-EGFP，表达质粒与包装质粒供转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达绿色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠L929细胞，成功表达出S1PR3。结论本研究成功构建了可以高表达S1PR3的pLenti6.3-S1PR3-IRES-EGFP慢病毒表达载体，为进一步调控S1PR3相关的细胞功能奠定了基础。

关键词：慢病毒、1-磷酸鞘氨醇受体3、血管损伤、再内皮化

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金编号81300153

在线出版日期：2015-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2653-2656