VEGF111b的表达载体构建及抗体制备

摘要：

目的：克隆VEGF111b基因，构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF111b，并进行测序，制备VEGF111b多克隆抗体。方法丝裂霉素C诱导处理卵巢癌SKOV3细胞24 h，设计VEGF111b酶切引物，以SKOV3细胞的cDNA为模板，通过PCR得到VEGF111b特异性基因产物，克隆入真核表达载体pcDNA3.1中，获得重组真核表达载体pcDNA3.1-VEGF111b，测序验证。用KLH耦联VEGF111b特异性短肽，制备多克隆抗体，Western blot检测其特异性。结果成功扩增了VEGF111b基因，双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中，测序结果与预测完全一致，成功制备了VEGF111b多克隆抗体，使用其多克隆抗体，Western blot能够检测到VEGF111b对应分子量的蛋白条带。结论本研究鉴定了pcDNA3.1-VEGF111b真核表达载体，并验证了VEGF111b多克隆抗体的特异性，为进一步研究VEGF111b蛋白的功能奠定了基础。

关键词：VEGF111b、pcDNA3.1、真核表达、多克隆抗体

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金编号81250030

在线出版日期：2014-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3277-3279,3280