毛囊细胞高效分离培养方法的建立

摘要：

【目的】建立一种简单易行、高效稳定、细胞活性好的毛囊细胞分离培养方法。【方法】无菌条件下剪下SD乳鼠触须部皮肤，拔出单个毛囊。采用Ⅰ型胶原酶、胰酶两步法消化毛囊，细胞悬液接种于细胞外基质包被的培养板中，以体积分数1%胎牛血清的K-SFM培养液培养，次日换无血清培养液。剩余组织块剪碎铺展于培养瓶中，添加含血清的HG-DMEM培养基常规培养。取以上2种细胞进行免疫荧光鉴定。毛囊上皮细胞进行流式细胞仪检测。【结果】两步酶法分离得到的毛囊上皮细胞贴壁迅速，圆形或多角形，呈典型铺路石状。培养的组织块周围有长梭形细胞爬出，细胞有突起，并连接成网状。毛囊上皮细胞CK15、 CK19、β1整合素表达阳性，以G1期细胞为主，占75.6%。毛囊结缔组织鞘细胞的层粘连蛋白、纤维连接蛋白、波形蛋白表达阳性。【结论】分离培养的细胞为毛囊干细胞和成纤维细胞，该方法得到的细胞贴壁快、均一性好、增殖能力强。

关键词：毛囊干细胞/病理学、成纤维细胞/病理学、分离、细胞培养

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金资助项目编号81102675

在线出版日期：2014-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：807-809,852