从江香猪源切除信号肽β干扰素原核载体的构建

摘要：

β干扰素(IFN-β)具有重要的抗病毒生物学功能,为了研究从江香猪源IFN-β生物活性,试验设计1对扩增切除信号肽序列的香猪源IFN-β编码区引物,以pUCm-T-IFN-β为模板进行PCR扩增,经菌液PCR筛选、测序鉴定后,获得重组质粒pColdⅠ-CJ-poIFN-β,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳,Western blot方法对重组表达蛋白进行分析.结果:切除信号肽序列的从江香猪源IFN-β序列编码区长为498 bp,表明该片段已正确插入原核表达质粒pColdⅠ中;SDS-PAGE蛋白电泳在预期位置未见蛋白条带,但Western blot检测显示带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,显色后条带为18.26 ku,与预期大小相符.结果显示:试验成功构建了携带切除信号肽序列的香猪源IFN-β基因的原核表达质粒,但重组蛋白表达量极低,试验结果为进一步研究从江香猪源-β干扰素的生物活性奠定基础.

关键词：从江香猪、β干扰素、信号肽、原核表达

所属期刊栏目：42

分类号：S828.8;Q7(家畜)

资助基金："NSP2亚类在PRRSV复制过程中的作用机制研究"贵州省科学技术基金黔科合J字20152046号;"P-Body在PRRSV复制和持续感染过程中的作用机制研究"国家自然科学基金31460668;"LSm14A分子在新城疫病毒增殖中的作用"贵州大学博士基金贵大人基合字201312号;"贵州省高层次创新型人才培养"黔财教[2017]号;贵州省研究生工作站计划项目GZZ2017002

在线出版日期：2018-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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