运用BioID技术筛选水稻GS3互作蛋白

摘要：

水稻异源三聚体G蛋白系统中的非典型γ亚基GS3,是一个控制籽粒大小的主效数量效应基因座,在调节籽粒大小中发挥负调控因子的功能.BioID (proximity-dependent biotin identification)为邻近蛋白标记技术,其工作原理是生物素连接酶能使其周围的蛋白带上生物素,同时生物素又能和链霉亲和素紧密结合,所以能够利用链霉亲和素偶联的磁珠富集目标蛋白.该技术具有灵敏、高效和周期短等特点,为筛选互作蛋白提供了新方法.为了解析GS3的蛋白调控网络,该研究以水稻原生质体为材料,采用BioID 技术对GS3在水稻中的互作蛋白进行了筛选.Western-blot结果表明:融合蛋白BirAG-GS3在原生质体中成功表达并生物素化GS3邻近蛋白.使用链霉亲和素磁珠富集生物素化后的蛋白,并进行蛋白质谱测序,获得了与GS3邻近的可能存在直接或间接互作的蛋白.将获得的蛋白进行功能富集与注释,并构建蛋白-蛋白互作网络.对部分蛋白进行了BiFC 验证,发现GS3可能与ICL、PPDK、RPN7和RH15发生相互作用,涉及能量代谢的调节、种子淀粉物质的储存、泛素-蛋白酶体系统以及凋亡途径等生物过程.

关键词：BioID、GS3、水稻、籽粒大小、互作蛋白

所属期刊栏目：38

分类号：Q943(植物学)

资助基金：国家自然科学基金31571759Supported by the National Natural Science Foundation of China31571759

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：771-780