高盐促大鼠血管平滑肌细胞增殖的时效量效关系及相关机制

摘要：

目的 比较不同Na+浓度及其作用时间促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的差异,探讨高盐诱导VSMC增殖的可能机制.方法 组织贴壁法培养原代VSMC,传至第四代去血清同步化1d,分别用139、141、144、147、150、153、156、159、162和165 mmol/L的Na+干预1、2、3和4d后,MTT比色法和细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测VSMC增殖情况.选取促增殖最显著的盐浓度和作用时间,以Na+ 139 mmol/L为对照进行后续实验.CCK-8法检测渗透压对VSMC增殖的影响;流式细胞仪分析VSMC增殖周期;免疫荧光染色和Western blot检测VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的表达情况;实时荧光定量PCR检测VSMC中血管紧张素原(AGT)、AT1R mRNA的表达.结果 MTT和CCK-8结果显示,Na+ 153～165 mmol/L作用2、3d可促进VSMC增殖(Na+ 159 mmol/L作用3d最明显);CCK-8检测渗透压对VSMC增殖结果显示,与Na+ 139 mmol/L组比较,Na+ 159 mmol/L细胞明显增殖[(1.21±0.16)％比(1.00±0.25)％,P＜0.05],而甘露醇组与Na+ 139 mmol/L组比较差异无统计学意义;流式细胞仪分析VSMC增殖周期结果显示,Na+ 159 mmol/L组Go/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增多(均P＜0.05);PCNA免疫荧光染色可见Na+ 159 mmol/L组VSMC中PCNA阳性细胞核增加,Western blot结果显示Na+ 159 mmol/L组PCNA蛋白表达明显增加(均P＜0.05);实时荧光定量PCR显示,与Na+ 139 mmol/L组相比,Na+ 159 mmol/L组中AGT、AT1RmRNA表达增加(均P＜0.05);Western blot显示,与Na+ 139 mmol/L组相比,Na+ 159 mmol/L组中AngⅡ、AT1R蛋白表达增多(均P＜0.05).结论 高Na+ (153～165 mmol/L)作用2～3 d能诱导VSMC增殖,且Na+ 159 mmol/L作用3d增殖效应最为显著;作用机制可能与高Na+促进AngⅡ和AT1R表达有关.

关键词：高Na+、血管平滑肌细胞、增殖、时效关系、量效关系、血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅱ1型受体

所属期刊栏目：25

分类号：R28;R322.12;R733.71

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;贵州省优秀科技教育人才省长专项;国家国际科技合作专项基金;贵州省卫计委资助项目

在线出版日期：2017-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：264-271