METTL3调控miR-301a促进缺氧环境下内皮集落形成细胞血管生成

摘要：

目的:探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞(ECFCs)血管生成能力的影响及甲基转移酶样3(METTL3)的调控作用.方法:分离、培养犬外周血ECFCs.实验分为正常对照组与缺氧实验组.缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200 μmol/L氯化钴(CoCl2)的培养基处理细胞24 h,对照组CoCl2浓度为0.CCK-8检测不同浓度CoC12对ECFCs增殖的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,筛选适宜浓度的CoCl2用于缺氧环境构建.Transwell实验和管形成实验分别检测ECFCs迁移和血管生成能力.RT-qPCR和western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)、CD31、METTL3、miR-301a的表达情况.构建沉默METTL3慢病毒转染ECFCs,将ECFCs分为NC-shRNA组和METTL3-shRNA组.RT-qPCR和western blotting检测ECFCs细胞中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a表达水平的变化.结果:与正常对照组比较,50μmol/L和100 μmol/L的CoCl2培养ECFCs 24 h后可促进细胞增殖(均P＜0.000 1),HIF-1α随着CoCl2浓度升高而高表达(P＜0.01).100 μmol/L CoCl2组中 ECFCs迁移能力和血管生成能力提高(均P＜0.01),VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA水平表达升高(均P＜0.01),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达升高(均P＜0.01).与NC-shRNA组比较,METTL3-shR-NA 组中 VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA 表达降低(均P＜0.05),VEGF、CD31、METTL3 蛋白表达降低(均 P＜0.05).结论:适宜的缺氧干预可提高ECFCs增殖、迁移和血管生成能力,METTL3/miR-301a轴可能参与调控血管生成.

关键词：缺氧、内皮集落形成细胞、血管生成、甲基转移酶样3

所属期刊栏目：41

分类号：R364.3(病理学)

资助基金：国家自然科学基金;广西科技基地和人才专项;广西医疗卫生适宜技术开发与推广应用项目;南宁市青秀区科技计划项目

在线出版日期：2024-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：841-848