hCAFs的原代培养及其分泌蛋白聚糖谱探究

摘要：

目的:研究人肝癌相关成纤维细胞(hCAFs)的原代培养及其分泌蛋白聚糖谱.方法:组织块贴壁法与酶消化联合组织块贴壁法进行hCAFs和正常成纤维细胞(NFs)的原代培养,观察两种方法对组织周围爬出细胞天数的影响;差速消化法和反复贴壁法进行成纤维细胞的纯化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫印迹法(western blotting)、间接免疫荧光结合形态学观察对成纤维细胞进行鉴定;利用凝集素芯片检测hCAFs和NFs分泌蛋白聚糖谱.结果:与组织块贴壁法相比,酶消化法联合组织块贴壁法细胞爬出天数减少(P＜0.01);经纯化后hCAFs的胞体较大,胞体突起较多,而NFs胞体较小,胞体突起较少;两种成纤维细胞中均有FSP、FAP、α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA的表达,而在hCAFs中表达较高(P＜0.05).hCAFs的分泌蛋白对CALSEPA、JAC、MPL、SSA、STL等5种凝集素的亲和性增强,而对IRA、IAA、PSA、CSA、GSL-IA4的亲和性减弱.结论:酶消化联合组织块贴壁法可加速细胞爬出,更适于原代培养成纤维细胞;通过比较hCAFs和NFs的分泌蛋白聚糖谱,提示T/Tn抗原、唾液酸、N-乙酰氨基葡萄糖结构在hCAFs的分泌蛋白中增加;而N-乙酰半乳糖胺和α-甘露糖的结构减少.

关键词：成纤维细胞、肿瘤微环境、凝集素芯片、分泌蛋白聚糖谱

所属期刊栏目：40

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;广西自然科学基金青年基金项目

在线出版日期：2023-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：413-419