EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬减轻心肌缺血/再灌注损伤

摘要：

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)预处理心肌细胞分泌的外泌体(exosomes)对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及分子机制.方法:体外培养H9c2心肌细胞,给予或不给予EGCG预处理,建立缺氧/复氧模型.提取、纯化外泌体,采用在体基因干扰或基因敲除技术,构建antagomiR-30a和Beclin-1+/-小鼠,建立I/R模型,缺血30 min心肌注射外泌体,研究EGCG预处理心肌细胞分泌的exosomes(EGCG-exosomes)对I/R的作用.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a与Be-clin-1的相互作用,TTC染色法检测心肌梗死面积,苏木精—伊红(HE)染色观察心肌细胞形态变化;酶联免疫吸附试验(ELI-SA)法检测血清心肌肌钙蛋I(cTnI)含量;透射电子显微镜观察自噬小体数量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白印迹法(western blotting法)检测miR-30a与自噬相关基因和蛋白的表达.结果:与I/R组相比,exosomes组自噬体数量减少,心肌损伤减轻.与exosomes组相比,EGCG-exosomes组心肌梗死面积缩小,cTnI含量降低,自噬体数量减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达下调,cathepsin D蛋白表达下调,p62基因及蛋白表达上调;沉默miR-30a促进心肌I/R自噬发生,给予EGCG-exosomes 则逆转上述作用;此外,敲低Beclin-1与EGCG-exosomes有协同抑制自噬作用(均P＜0.05).结论:EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬,减轻心肌I/R损伤.

关键词：EGCG-exosomes、缺血/再灌注损伤、自噬、miR-30a/Beclin-1

所属期刊栏目：40

分类号：R542.2(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广西自然科学基金资助项目

在线出版日期：2023-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：236-244