过表达LRRFIP1对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响

摘要：

目的:探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制.方法:构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(western blotting)检测过表达效率,细胞增殖实验(CCK-8)检测过表达LRRFIP11对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞周期和凋亡的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达LR-RFIP1对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测与上皮间质转化(EMT)相关的蛋白E-cadherin、N-cadherin,Vimentin和Snail的表达;免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联(CoIP-MS)法筛选可能与LRRFIP1互作蛋白.结果:过表达LRRFIP1促进了 Huh7细胞的增殖(P＜0.001)和克隆形成能力(P＜0.001),抑制了细胞凋亡(P＜0.01);过表达LRRFIP1导致Huh7细胞G0/G1期比例减少,S期增加(P＜0.001,P＜0.01).此外,过表达LRRFIP1组细胞的迁移(P＜0.05)和侵袭(P＜0.001)数量显著低于对照组;western blotting实验结果显示,与对照组相比,过表达LRRFIP1组细胞上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著升高(P＜0.001),间充质细胞标志蛋白N-cadherin和Vimentin表达显著减低(P＜0.001,P＜0.01),EMT相关转录因子Snail蛋白表达显著降低(P＜0.001).最后,过表达LRRFIP1后我们采用CoIP-MS法筛选出80个可能与其互作蛋白,GO分析显示Huh7细胞株中下拉LRRFIP结合蛋白富集于27个生物过程、11个细胞组分和9种分子功能.KEGG通路注释显示这80种蛋白主要富集于ECM-受体相互作用信号通路;STRING和Cytoscape分析Hub基因.结论:LRRFIP1过表达促进了肝癌细胞Huh7的增殖和克隆形成能力,抑制其凋亡、迁移、侵袭能力;LRRFIP1可能与eEF1A1相互作用,从而影响肝癌的发生发展.

关键词：LRRFIP1、原发性肝癌、Huh7、增殖、迁移、CoIP-MS

所属期刊栏目：40

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;广西自然科学基金面上项目

在线出版日期：2023-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：206-213