人黑素瘤相关抗原D4原核表达条件的优化

摘要：

目的:探索黑素瘤相关抗原D4 (MAGE-D4)基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量.方法:设置不同宿主菌(DH5α、TB1、Rosetta)、诱导时机(重组菌分别培养0.5～3 h后进行诱导)、诱导剂IPTG浓度(0.1～0.9 mmol/L)和诱导时间(1～8 h)等条件,诱导MAGE-D4重组质粒表达,通过SDS-PAGE电泳和Image J软件扫描电泳图谱的方法,对目的蛋白的表达量和可溶性进行分析.通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对35例肝癌患者血清MAGE-D4抗体进行检测,分析MAGE-D4融合蛋白的免疫活性.结果:将重组质粒转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,菌液OD600达到0.8时加入IPTG至终浓度0.9 mmol/L,37℃诱导培养7h,可有效提高目的蛋白的表达量.可溶性MAGE-D4融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的25.5％.肝癌患者血清中MAGE-D4抗体的阳性率为28.57％(10/35),其MAGE-D4抗体平均效价明显高于正常人(P＜0.05).结论:本研究优化了MAGE-D4融合蛋白的原核表达条件,获得了可溶性、具有免疫活性的重组蛋白.

关键词：黑素瘤相关抗原D4、原核表达、优化

所属期刊栏目：36

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学地区基金资助项目81660464;广西高校科学技术研究课题资助项目KY2015YB058;广西医科大学青年科学基金资助项目GXMUYSF2014012;广西高校生物分子医学研究重点实验室开放课题资助项目GXBMR201601

在线出版日期：2019-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1050-1055