齿垢密螺旋体精氨酸激酶TDE2037的原核表达与纯化

摘要：

目的:构建齿垢密螺旋体TDE2037基因的原核表达质粒,表达及纯化TDE2037精氨酸激酶蛋白.方法:以齿垢密螺旋体基因组DNA为模板,PCR扩增TDE2037基因,PCR产物经限制性内切酶消化后,由T4 DNA连接酶连接原核表达载体pET-21a以及pET28a-SUMO,连接产物分别转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并使用分子排阻预装柱提高蛋白纯度.结果:成功构建TDE2037基因的原核表达质粒,经测序与基因库(Genbank)的TDE2037序列一致,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导表达目的蛋白,融合蛋白由pET-2 1a-TDE2037表达形成包涵体;由pET28a-TDE2037-SUMO表达部分形成包涵体,部分为可溶蛋白.镍柱亲和层析法成功纯化目的蛋白.结论:成功构建齿垢密螺旋体TDE2037基因的原核表达质粒,并表达纯化了重组融合目的蛋白,为下一步研究奠定基础.

关键词：齿垢密螺旋体、蛋白纯化、精氨酸激酶

所属期刊栏目：34

分类号：Q51(蛋白质)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81160133

在线出版日期：2018-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1686-1690