FOXP3基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

摘要：

目的:构建FOXP3基因3'-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs.方法:利用PCR方法,根据FOXP3基因3'-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-UTR序列,将其克隆到pmiRB-REPORT双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’-UTR相互作用的miRNAs;利用LipofectaminTM 2000试剂将miRNAs mimics与构建好的FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中,然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,并与空白对照相比较.结果:经酶切及基因测序验证,成功构建含有FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体;Targetscan软件预测显示,FOXP3基因3’-UTR可能是miR 608的作用靶位点;双荧光报告显示,miR 608 mimics组比空白对照组[(0.700 0±0.016 41)比(1.000±0.055 75) (P＜0.001)] FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降30％.结论:FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,初步证实miR 608对FOXP3有调控作用.

关键词：双荧光素酶基因报告、转录因子叉头样p3、微小RNA-608、3’-非编码区

所属期刊栏目：31

分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：广西自然科学基金资助项目桂科青0728071;广西卫生厅科研资助项目Z2007084

在线出版日期：2014-06-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：170-173