GPC3真核表达载体的构建及其对肝癌细胞功能的影响

摘要：

目的:通过构建GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3,GPC3)促细胞增殖效应的影响,探讨GPC3基因对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响.方法:应用基因重组技术及限制性内切酶酶切构建并鉴定pEGFP-IRES-Nl-GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM 2000介导转染BEL-7404后,通过G418筛选出抗性克隆,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GPC3 mRNA在真核细胞中的表达,并在激光共聚焦显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况,采用免疫荧光法和流式细胞仪检测GPC3对细胞增殖效应的影响.Transwell 小室实验检测BEL-7404肝癌细胞的侵袭能力.结果:限制性内切酶酶切分析、重组质粒测序鉴定表明为正确重组子,荧光显微镜下可见转染的真核细胞胞膜区发出强绿色荧光,RT-PCR法表明GPC3在真核细胞中成功表达,转GPC3的BEL-7404肝癌细胞与对照组相比有促细胞增殖及侵袭和转移效应.结论:构建完成真核表达重组质粒pEGFP-IRES-N1-GPC3;GPC3基因在BEL-7404中成功表达;GPC3可促进肝癌细胞的增殖,其通过增加细胞的侵袭能力而促进肝癌的转移.

关键词：Glypican-3、真核表达载体、肝癌细胞、增殖

所属期刊栏目：28

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：广西卫生厅重点研究课题广西卫生厅重200703号

在线出版日期：2011-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：348-351