兔骨髓间充质干细胞的分离培养鉴定及BrdU标记的体外研究

摘要：

目的:拟在体外建立一种分离纯化、培养扩增、标记兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法.方法:密度梯度离心和贴壁培养相结合,台盼蓝染色观察离心后细胞活性,绘制BMSCs生长曲线,流式细胞仪检测BMSCs表面标记.诱导传代细胞向成软骨细胞分化,2周后免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达和阿尔新蓝染色检测蛋白多糖的表达.BrdU标记BMSCs,观察最佳标记率及标记时间,并予四甲基偶氮唑盐方法测定标记后细胞活性.结果:密度梯度离心结合贴壁法能分离培养出纯度较高的BMSCs,分离后细胞活性均大于99%,BMSCs表面标记CD90、CD45、CD34阳性细胞表达分别为99.24%、0.03%、1.37%,BMSCs的生长曲线呈S形.成软骨诱导2周后Ⅱ型胶原免疫组化阳性,阿尔新蓝染色细胞基质被蓝染.BrdU标记后,MSCs标记率>95%,BrdU细胞标记最佳时间为48 h,最佳浓度为10 mg/L,标记后细胞活性高.结论:采用密度梯度离心和贴壁培养相结合,可获得纯度较高BMSCs;BrdU是一种简单、有效的标记BMSCs的方法,BrdU对细胞标记率高.

关键词：骨髓间充质干细胞、分离、培养、诱导、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、四甲基偶氮唑盐

所属期刊栏目：28

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：广西留学回国人员科学基金资助项目桂科回0832012

在线出版日期：2011-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：169-173