转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建细胞周期相关转录因子E2F-1 RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体.方法:选取E2F-1基因的19 nt特异性序列,设计针对E2F-1的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pLentiLox 3.7(pLL 3.7)慢病毒表达载体中,Xba I和 Not I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将慢病毒的混合包装载体质粒和包含E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒48 h后,收集病毒颗粒,孔稀释法测定病毒滴度.结果:双酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确;293FT细胞包装E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体成功;收集的细胞培养上清液中,病毒的滴度为5×107 TU/mL.结论:成功构建人E2F-1基因RNAi慢病毒载体,为研究E2F-1对于胃癌生长的影响提供了稳定的转染细胞载体.

关键词：慢病毒载体、E2F-1、RNAi

所属期刊栏目：27

分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30860273

在线出版日期：2010-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：165-168