优化阳离子脂质体介导的组织因子小干扰RNA转染HEK-293的转染条件

摘要：

目的:优化lipofectamineTM2000介导的组织因子(TF)小干扰RNA(siRNA)的转染条件.方法:化学合成法合成特异的TF siRNA,利用绿色荧光蛋白(GFP)进行标记,分别将1.0 μL和1.5 μL的lipofectamineTM2000与含有20、30、40、50、60 pmol的TF siRNA混合液制备成相应的转染混合物,转染人胚胎肾细胞株(HKE-293)24 h后,在荧光显微镜下计数阳性细胞率.同时,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测每组细胞活性.结果:转染效率和细胞活性与lipofectamineTM2000以及siRNA有明显的交互作用,在1.0 μL的lipofectamineTM2000和50 pmol siRNA转染HEK-293细胞时,细胞转染效率最高,转染效率达(86.5±2.4)%,在1.5μL的lipofectamineTM2000转染40 pmol siRNA时,细胞活性为(86.0±7.8)%.结论:经优化转染条件后的lipofectamine TM 2000可高效的将化学合成的siRNA转染入HKE-293细胞株,且细胞活性达85%以上,为建立稳定的沉默转染体系提供实验基础.

关键词：组织因子、阳离子脂质体、小干扰RNA、转染

所属期刊栏目：26

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：广东省科技计划项目2006B36008015

在线出版日期：2009-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：176-179