uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的:克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体.方法:采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-T Easy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his(-)B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot 法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达.结果:成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot 能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达.结论:成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础.

关键词：卵巢上皮癌、UPA、PAI-I、真核表达载体、构建

所属期刊栏目：26

分类号：R73-37;R737.31(肿瘤学)

资助基金：广西自然科学基金资助项目桂科基0342010-5

在线出版日期：2009-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：26-29