刚地弓形虫亲环蛋白基因TgCyP真核表达质粒的构建及其在Hela细胞内的表达

摘要：

亲环蛋白（cyclophilin，CyP）是一类广泛存在于原核和真核生物体内的胞溶性蛋白，是刚地弓形虫（Toxoplasmngondii）速殖子的主要成分，能够诱导产生IL-12和IFN-γ，在控制弓形虫急性感染过程中起重要作用。本研究根据GenBank发表的TgCyP基因序列，设计并合成一对包含BamHI和EcoRI酶切位点的引物，以cDNA为模板，应用PCR技术扩增TgCyP基因。PCR产物连接到pMD18-T克隆载体。用限制性内切酶BamHI和EcoRI双酶切克隆载体，将TgCyP目的基因克隆到载体pVAXI，构建真核表达质粒pVAXl-TgCyP。将真核表达质粒转染Hela细胞，利用问接免疫荧光检测其在Hela细胞内的表达情况。结果表明扩增的TgCyP基因与GenBank上相应基因序列（U04633．1）的一致性达100％，构建的真核表达质粒pVAX1-TgCyP能在转染的Hela细胞中表达，其表达产物与刚地弓形虫阳性血清具有免疫反应性。本研究表明Tg-CyP有望作为弓形虫疫苗的候选抗原，将为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定基础。

关键词：刚地弓形虫、TgCyP、基因克隆、真核表达

所属期刊栏目：30

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑计划课题2008BAD96811-31资助

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：311-315