人TPO基因定点整合荷斯坦牛αs1-酪蛋白基因打靶载体构建

摘要：

应用LA-PCR的方法,从荷斯坦牛基因组中成功地扩增获得6.0 kb和1.78 kb两个基因片段,其中6.0 kb包括αs1-酪蛋白基因5'调控序列到第三内含子部分,1.78 kb包括αs1-酪蛋白基因第十二内含子到第十四内含子之间序列,作为打靶载体的同源臂;从新生儿血液基因组中扩增获得5.5 kb的血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组序列,包括第一内含子部分序列到3'终止子后的序列.以水牛β-酪蛋白基因的5'调控区4.4 kb片段为启动子,以pLoxp质粒为打靶载体骨架,加上同源臂片段和目的基因TPO的片段,经多步酶切-连接-转化-筛选-鉴定基因重组过程,最终建成长达25 kb的人TPO基因定点整合荷斯坦牛αs1-酪蛋白基因打靶载体,PCR和酶切分析表明载体构建正确,为研制定点整合荷斯坦牛乳腺生物反应器莫定了基础.

关键词：血小板生成素、定点整合、αs1-酪蛋白、载体

所属期刊栏目：27

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家863计划项目2007AA100505;广西大学科研基金项目X071101

在线出版日期：2008-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：93-98,114